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                    一文看懂什么是逆轉錄病毒包裝服務

                    發布日期: 2021-12-24
                    瀏覽人氣: 127
                       相信有很多小伙伴會好奇逆轉錄病毒包裝服務是用來干嘛的呢?下面跟著小編一起去看看吧!病毒載體是人為調節細胞內或機體內基因表達常用的方式之一,通過病毒感染的方式可以將外源的基因片段穩定整合到宿主細胞基因組內,從而達到持續、穩定的表達外源基因的目的。
                      
                      什么是逆轉錄病毒包裝服務
                      10cm大皿接種5×106個Plat-E細胞,加入10ml含10%FBS的DMEM培養基過夜,12h后顯微鏡下觀察細胞密度80%-90%為宜。15ug目的質粒和500ulOpti-MEM培養基混合,同時45ug轉染試劑和500ulOpti-MEM培養基混合,5min后轉染試劑Opti-MEM加至質粒Opti-MEM中,靜置20min,將混合物滴入Plat-E細胞中混勻,37℃5%CO2培養箱中培養,8-10h后更換新鮮DMEM培養基。轉染48h,72h后收集病毒上清,0.44um濾器過濾-80℃保存。
                      
                      慢病毒(Lentivirus)是逆轉錄病毒的一種,它能夠將靶基因導入到一些較難轉染的細胞,如原代細胞等,并且將靶基因隨機整合到宿主的基因組中,從而大大增加了轉染效率,并且能夠在細胞系中穩定表達若干代,可以進行穩轉細胞株的篩選。因為是隨機整合,也有不確定因素,有些公司還能提供定點整合技術,將靶基因定點整合到基因組特定的部位,從而保證其高效表達并且對細胞不產生隨機整合可能產生的傷害。
                      
                      慢病毒載體基因組是正鏈RNA,其基因組進入細胞后,在細胞漿中被其自身攜帶的逆轉錄酶逆轉錄為DNA,形成DNA整合前復合體,進入細胞核后,DNA整合到細胞基因組中。整合后的DNA轉錄mRNA,回到細胞漿中,表達目的蛋白或產生RNAi干擾。
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